Extracellular matrix molecules as targets for brown spider venom toxins

Loxoscelism, the term used to describe lesions and clinical manifestations induced by brown spider's venom (Loxosceles genus), has attracted much attention over the last years. Brown spider bites have been reported to cause a local and acute inflammatory reaction that may evolve to dermonecrosis (a hallmark of envenomation) and hemorrhage at the bite site, besides systemic manifestations such as thrombocytopenia, disseminated intravascular coagulation, hemolysis, and renal failure. The molecular mechanisms by which Loxosceles venoms induce injury are currently under investigation. In this review, we focused on the latest reports describing the biological and physiopathological aspects of loxoscelism, with reference mainly to the proteases recently described as metalloproteases and serine proteases, as well as on the proteolytic effects triggered by L. intermedia venom upon extracellular matrix constituents such as fibronectin, fibrinogen, entactin and heparan sulfate proteoglycan, besides the disruptive activity of the venom on Engelbreth-Holm-Swarm basement membranes. Degradation of these extracellular matrix molecules and the observed disruption of basement membranes could be related to deleterious activities of the venom such as loss of vessel and glomerular integrity and spreading of the venom toxins to underlying tissues

Características de la producción de la renina microbiana de Mucor miehei en un proceso de alimentación por lote / Mucor miehei's microbial rennin production characteristics in a fed-batch proccess

El moho zigomiceto Mucor miehei produce una proteasa de tipo ácido (EC: 3.4.23.10) semejante a la renina o cuajo de ternero. Se ha encontrado que la síntesis de la enzima está parcialmente asociada al crecimiento, y que altas velocidades de consumo de glucosa dan como resultado una mayor producción de la renina microbiana (Escobar and Barnett, 1993, 1995). Durante el proceso de produc-ción de la proteasa se observó que cuando la velocidad de producción de la misma aún es alta, los niveles de glucosa alcanzan a ser mínimos, niveles que se consideraron como una de las posibles causas de la finalización de la produc-ción de la enzima (Escobar and Barnett, 1993,1995). Frente a esta limitación fisiológica, se planteó un proceso de dos etapas para mejorar la producción de la proteasa y superar el fenómeno mencionado.La primera consistió en estudiar la relación entre la pro-ducción de la renina y el consumo de azúcares (especial-mente la glucosa) en el transcurso de la fermentación, para determinar aquellos momentos en los que la rata de pro-ducción de enzima es alta y la concentración de glucosa se encuentra cercana a cero. En la segunda etapa se aplicó un proceso de alimentación por lote de glucosa durante esos momentos, para observar si la producción de la enzi-ma aumentaba.Se obtuvo un valor máximo de actividad enzimática (AE) de 165 unidades coagulantes (UC)/ml para el proceso en cochada y una velocidad de consumo de azúcares prome-dio de 0,1813 g de glucosa/1/h. Con base en los resultadosanteriores se determinaron condiciones para el proceso de alimentación por lote de glucosa, tales como veloci-dad, tiempo y concentración. Las condiciones para el pro-ceso de alimentación por lote fueron un flujo de 0,06 ml/ min y una concentración de glucosa de 50 g/1 sin obtener-se aumento considerable en el valor de la AE (95 UC/ml). Se obtuvo una concentración celular promedio de 11 g/1 y un rendimiento del nutriente en masa celular (YX/SA) pro-medio de 0,3 g de células/g...

Anticuerpos anti-citoplasma de neutrófilos: aspectos bioquímicos y metodológicos, importancia en diferentes patologías / Antineutrophil cytoplasmic antibodies: biochemical and methodological aspects, their importance in diferents pathologies

Los anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos, ANCA, se encuentran involucrados en la patogénesis de las diferentes formas de las vasculitis inmunes. Su descubrimiento y posterior estudio ha permitido su utilización como elemento de ayuda diagnóstica y de seguimiento en enfermedades tales como la granulomatosis de Wegener, panarteritis microscópica y glomerulonefritis cresenticas necrotizantes. El objetivo de esta revisión es tratar de comprender las diferentes formas de vasculitis y así orientarse con respecto al diagnóstico de las mismas. La técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) que hasta el momento es la única normatizada, sigue siendo una herramienta fundamental para la detección de ANCA dada su elevada especificidad; pero no debe olvidarse que posee como interferentes a los anticuerpos antinucleares (ANA). Se desarrolló un absorvente a partir de un extracto nucleoproteico de timo vacuno que permite eliminar la interferencia que producen los ANA cuando están presente en una muestra donde se quiere determinar ANCA. De esta manera se logró optimizar la IFI-ANCA, lo cual quedó demostrado que los resultados obtenidos cuando se utilizó esta técnica en conjunto con ELISA antígeno específico, LIA blot antígeno específico y Dot blot gránulos Ó desarrollados. Resultados preexistentes en relación con los ANCA y colangenopatías como el lupus eritematoso sistémico (LES) pediátrico y la artritis reumatoidea (AR) mostraban resultados dispares entre diferentes autores, lo que generó la inquietud de estudiar la seroprevalencia en estas enfermedades y su importancia clínica. Se demostró relación entre ANCA e insuficiencia renal en LES pediátrico, no así en AR. Se generó la hipótesis que la presencia de ANCA sea un epifenómeno derivado de la respuesta inflamatoria. También se pudo demostrar la presenciade ANCA en pacientes con glomerulopatías sin evidencias clínicas ni anatomopatológicas de vasculitis como son las glomerulopatías: de la diabetes, IgA, membranoproliferativas, mesangial, membranosa, nefroesclerosis, esclerosis focal y segmentaria, todas ellas asociadas a microhematuria y/o proteinuria en diferentes grados. Finalmente la revisión de este tema y en particular el desarrollo y optimización de los métodos de detección ha permitido ampliar y profundizar el campo de estudio en relación con los ANCA arribando a las conclusiones aquí expresadas

A new brain metalloendopeptidase which degrades the Alzheimer beta-amyloid 1-40 peptide producing soluble fragments without neurotoxic effects

A new metalloendopeptidase was purified to apparent homogeneity from a homogenate of normal human brain using successive steps of chromatography on DEAE-Trisacryl, hydroxylapatite and Sephacryl S-200. The purified enzyme cleaved the Gly(33)-Leu(34) bond of the 25-35 neurotoxic sequence of the Alzheimer Beta-amyloid 1-40 peptide producing soluble fragments without neurotoxic effects. This enzyme activity was only inhibited by divalent cation chelators such as EDTA, AGTA and o-phenanthroline (1 mM) and was insensitive to phosphoramidon and captopril (1 muM concentration), specific inhibitors of neutral endopeptidase (EC 3.4.24.11) and angiotensin-converting enzyme (EC 3.4.15.1), respectively. The high affinity of this human brain endopeptidase for Beta-amyloid 1-40 peptide (Km = 5 muM) suggests that it may play a physiological role in the degradation of this substance produced by normal cellular metabolism. It may also be hypothesized that the abnormal accumulation of the amyloid Beta-protein in Alzheimer´s disease may be initiated by a defect or an inactivation of this enzyme.

Seroreactivities of proteinases of Candida albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis in sera from various Candida species-infected mice

From the culture filtrates of C. albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis, proteinases were purified using a series of chromatographic steps consisting of DEAE-Sepharose, Sephacryl S-200 and size-exclusion HPLC which removed contaminating mannoproteins and extraneous proteins. Anti-Candida proteinase antibodies in sera from mice infected with various Candida species were detected using ELISA for serodiagnosis of candidiasis. Three proteinases were blotted by homologous and heterologous anti-proteinase antisera on Western blot analysis. All sera from six Candida species-infected mice were reactive with proteinases of C. albicans, C. tropicalis, and C. parapsilosis, although C. glabrata, C. guilliermondii, and C. krusei did not secrete proteinase. The seroreactivities of proteinase with sera from mice infected with homologous C. albicans and C. tropicalis were higher than those with sera from heterologous Candida species-infected mice. These results suggest that three proteinases have at least one common epitope, but its application for diagnosis of candidiasis should be considered with limits of specificity.

Candida albicans isolates from the oral mucosa of healthy carriers

Foram estudadas 30 amostras de Candida albicans, isoladas da mucosa bucal de portadores saudáveis, dentados, fumantes e näo fumantes. O estudo compreendeu tanto características morfofisiológicas (padräo, clássico), como algumas propriedades tidas como fatores de virulência in vitro da levedura (produçäo de proteinase e fosfolipase). A partir do perfil estudado, foi possível compor biotipos, que foram discutidos, à luz da interaçäo da levedura com o meio bucal humano. Dentre os 11 biotipos encontrados, o mais frequente foi 11114 (36,7 por cento), seguido de 11124 e 221114, ambos com 13,4 por cento e 2114 com 10,0 por cento. Todos os demais figuraram com frequência de 3,3 por cento